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Exercice n°15:
ETUDE DE LA CROISANCE DE Staphylococcus aureus

Question 1: Après incubation à 37°C, les milieux 1 et 2 deviennent troubles alors que le milieu 3 reste limpide. Interprétez ces résultats. Quels sont les rôles du glucose, de la thiamine, des extraits de viande ?

RéponseGlucose: source de carbone et d'énergie.
Thiamine: facteur de croissance nécessaire à la synthèse de cofacteurs enzymatiques.
Extraits de viande: apport de peptides et acides aminés soit facteurs de croissance, soit source de carbone et d'azote ou les 2.



Question 2: L'évolution de la population bactérienne en fonction du temps dans les milieux 1 et 2 est suivie en mesurant l'absorbance A des cultures à 620 nm. Les résultats sont rassemblés dans le tableau suivant:

t en heures Ln A
milieu 1
Ln A
milieu 2
0 11,50 11,50
1 11,50 11,50
2 12,50 11,50
3 13,80 12,10
4 15,05 13
5 16,25 13,85
6 17,50 14,75
7 18,75 15,65
8 19,55 16,45
9 19,55 17,45
10 19,55 18,30
11 19,55 19,10
12 19,55 19,45

2.1. Tracer sur papier millimétré les courbes Ln A = f(t). Prendre comme échelle d'abscisse 1 cm = 30 mn et comme échelle d'ordonnée 1 cm = 0,5 U Ln

Réponse

Courbe Ln A = f(t)

2.2. Indiquer, pour la culture sur milieu 1, les noms, les dures et les significations physiologiques des différentes phases de la croissance.

RéponsePhase de latence: de 0 à 1heure. Pas d'évolution de la biomasse. Phase d'adaptation enzymatiqueau milieu.

Phase exponentielle: de 1,5 à 7,5 heures. Ln A évolue proportionnellement au temps, la vitesse de croissance est constante et maximale pour le cas considéré (taux de croissance).

Phase stationnaire: de 8 à 12 heures. La biomasse n'évolue plus, elle est arriée à un maximum, la vitesse de croissance apparaît nulle (en fait autant de cellule apparaissent par division qu'il n'en disparaît par lyse), ceci est du à l'épuisement progressif du milieu.

2.3. Définir les paramètres caractéristiques de la croissance. Déterminer graphiquement pour chaque cas le temps de génération (donnée Ln 2 = 0,7).

RéponseTaux de croissance = Vitesse spécifique de croissance en phase exponentielle, constante et maximale dans les conditions opératoires considérées.

Temps de génération: temps nécessaire au doublement de la population.

Culture milieu 1:
soit Ln N = 13,8 d'abscisse t = 3 heures pris en phase exponentielle
Pour doubler la population il faut arriver à 2 N
soit Ln 2N = Ln N + Ln 2 = 13,8 + 0,7 = 14,5
Ln N = 14,5 est un point qui a pour abscisse t = 3,5 heures.
G = 3,5 - 3 = 0,5 heures (30 min)

Culture milieu 2:
soit Ln N = 13,00 d'abscisse t = 4 heures
Ln 2N = 13,7, point d'abscisse t = 4,75.
G = 4,75 - 4 = 0,75 heures (45 mn).

2.4. Que peut-on conclure de la comparaison des 2 courbes ?

RéponseLe fait de travailler sur le milieu 1, complexe:
- limite la durée de la phae de latence (la bactérie s'y adapte plus vite car elle dispose de nutriments plus riches et élaborés)
- la croissance est plus rapide (pente supérieure à celle de la culture en milieu 2)
- on arrive plus vite en phase stationnaire alors que sur milieu 2 cette phase stationnaire n'est toujours pas atteinte après 12 heures de culture.